紫外可見分光光度計檢定規程適用于新制造、使用中和修理后的波長范圍為190~850nm或以上述區域為主要譜區的單光束紫外可見分光光度計進行檢定,以保證其測試結果準確可靠。
根據實踐經驗,為快速可靠地檢定紫外可見分光光度計,可按以下程序進行檢定:
外觀→絕緣電阻→穩定度→電源電壓影響→基線平直度→噪聲→波長準確度與重復性→靈敏度、Z小光譜通帶→吸收池配套性→雜散輻射率→透射比準確度與透射比重復性
先將紫外可見分光光度計預熱20min,在通電預熱的同時,可進行外觀檢查。必須注意,波長準確度與波長重復性的檢定,一定要在儀器穩定度合格的條件下進行,接著可進行靈敏度或Z小光譜帶寬的檢定。
當用標準溶液對透射比準確度與透射比重復性以及雜散輻射率進行檢定前,需對吸收池配套性進行檢定,因為吸收池不配套就將給透射比正確度的檢定帶來誤差,所以這種順序不要倒置。當然也有的計量部門用自己的洗后吃給用戶檢定儀器,這樣做的結果檢定誤差較小,但與實際使用情況有所脫節。所以應該將用戶的吸收池檢定后,誤差大的一只裝空白溶液,其余裝待測溶液,這樣檢定的透射比準確度與透射比重復性才準確可靠,對用戶使用紫外可見分光光度計也更具有實際意義。
紫外可見分光光度計具體檢定過程如下:
1、外觀及初步檢查
紫外可見分光光度計各調節器應調節自如。鎢燈和氘燈應能正常啟輝,儀器的波長度盤置于580nm處,在樣品室內應能觀察到光亮均勻、邊緣均勻的黃色光斑,光斑的亮度應隨狹縫寬度的增大而增強。
2、波長準確度與波長重復性的檢定
首先開啟氘燈,將光源選擇開關轉到氘燈位置,量程選擇開關調至0~1**%T,靈敏度開關轉向低(LOW)位置,波長調至486.00nm譜線。
調節調零旋鈕,使數字表顯示0000.0,關閉樣品室蓋,調節光亮旋鈕,使數字表顯示050.0。調節波長旋鈕,從短波方向緩慢轉動到486.00nm附近,觀察數字表顯示Zda值時的波長,重復三次。
然后關閉氘燈,開啟鎢燈,用標準鐠釹濾光片的529.8nm和807.7nm的吸收峰做參考波長,再次測量波長準確度。接著關閉氘燈和鎢燈,打開光源室蓋,設法將汞燈的窗口對準光源入射孔,臨時固定好。
Z后開啟汞燈光源,預熱至發光穩定,即可對波長進行檢定。如數字表顯示很小的數字,則說明石英汞燈光亮不夠,應重新對準。確實對準后,數字表的數字值若仍然很小,應提高紫外可見分光光度計的靈敏度,即將靈敏度開關撥向“HIGH"(高)位置。
3、靈敏度
將棱鏡式紫外可見分光光度計波長分別置于200.0nm、625nm處,調節暗電流為零后,打開光門,調節狹縫寬度,使透射比示值為1**%,讀取相應的狹縫寬度。
Z小光譜帶寬光柵型紫外可見分光光度計用汞燈435.83nm或儀器固有的氘燈的特征譜線,如656.1nm(656.3nm)。該儀器為自動掃描式儀器,可直接掃描譜圖,也可手動操作,將儀器波長度盤由短波向長波方向移動,記錄ZX波長兩側透射比值下降50%時的波長讀書λ之差,即為紫外可見分光光度計實際光譜帶寬。